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降解组测序技术(Degradome-seq)广泛应用于植物靶基因功能的研究、生物性状的调控研究、致病机理研究等领域,该技术的原理是检测miRNA等短链非编码RNA对于靶向基因的剪切作用,从而调控靶基因的功能。降解组测序技术在常规分子调控理论基础上,提供的广泛的验证信息,有力消除生信预测分析中的假阳调控关系,为更多真实可挖掘的调控机制提供验证支撑,有效助力paper提升层次。目前,联川众多客户选择了降解组测序服务,发表的大多数着作已被植物学核心期刊收录,诸如Nature Communications,PNAS,New Phytologist, Plant Cell,Plant physiology,Plant Journal等。
以下介绍的是联川客户发表在PNAS的文章,揭示了银杏古树长寿的机制,该研究工作被Science、Nature、BBC、New York times、CNN等国外多家知名媒体报道。值得一提的是,Small RNA-seq,RNA-seq,Degradome-seq,qRT-PCR是该研究主要的技术手段。
一、研究背景人和动物的衰老被认为主要与端粒损耗、DNA损伤、DNA突变积累、表观遗传改变等因素有关,寿命一般只有几十年,最长也仅100多年。然而与动物不同,自然界中,一些树种的年龄可达几百甚至上千年且依然生长旺盛。银杏 (学名:Ginkgo biloba L.) 是原产中国的孑遗植物,因其含有多种药用成分、观赏价值高,是重要的经济树种。在我国各地有大量银杏古树分布,银杏是着名的长寿树种,然而其长寿机制却一直不清楚。
扬州大学银杏研究团队、北京林业大学林金星团队和林木分子设计育种高精尖中心Richard Dixon团队合作在PNAS 杂志在线发表了题为Multi-feature analyses of vascular cambial cells reveal longevity mechanisms in old Ginkgo biloba trees的研究论文。研究团队历经7年时间,选用银杏树干维管形成层为主要研究材料,综合运用细胞学、生理学、多组学高通量测序(miRNA-转录组-降解组)和分子生物学等手段,揭示了银杏古树长寿的内在机制。
论文标题:Multifeature analyses of vascular cambial cells reveal longevity mechanisms in old Ginkgo biloba trees刊登时间:1月杂志信息:PNAS影响因子:9.58研究机构:扬州大学&北京林业大学
二、研究结果1、不同年龄银杏的表观形态分析
年轮宽度比较
叶片面积、种子萌发、光合作用能力比较
横断面、形成层细胞生理指标比较可以看出,年轮宽度在前100-200年之内下降得十分迅速,但是在200年之后就呈现出了非常小的变化,伴随着形成层细胞层数目的减少。形成层细胞中吲哚-3-乙酸IAA的浓度随着年龄的增加而降低,而脱落酸ABA的浓度正好相反。以上表观指标表明,古树随着年龄增长,其生长速度逐渐变缓。2、不同年龄银杏细胞分裂、细胞扩张和植物激素信号通路相关基因的表达情况(RNA-seq)
相关基因表达水平比较基因的表达分析结果表明,细胞分裂、细胞扩张以及分化相关的基因随着古树年龄增长其表达水平明显降低,然而古树树干的横截面积增加量 (BAI) 仍处于高水平,提示银杏古树形成层干细胞仍具有较强的持续不断的分裂能力。3、miRNA参与的与自噬、衰老、年龄相关的基因调控网络(Small RNA-seq,Degradome-seq)
miRNA对靶基因的调控网络miRNA参与了对自噬、衰老、年龄相关基因(WRKY, NAC, MYB家族基因)的调控,并通过降解组测序分析得到精确的miRNA剪切靶基因的调控机制。此外,该研究还在银杏叶片衰老过程以及更多年龄段的其他银杏植株中,进行了相关基因的验证,提示了银杏长期处于健康、稳定的状态的分子调控机制。4、抗性基因的表达模式(RNA-seq)
抗性基因表达情况树木的生长发育乃至衰老整个阶段都会应对环境胁迫、病虫害以及病菌等微生物的侵袭,树木最终大都是因为环境胁迫或病害而导致衰老和死亡。该研究结果显示,疾病抗性相关的基因以及能够合成具有预保护性的次生代谢物的基因在古树中保持较高的表达水平,提示了通过大量R基因的持续表达,以及积累具有特殊保护功能的代谢物来提高树体抗性,抵抗各种生物和非生物胁迫,从而大大延长了树体的寿命。三、研究结论
衰老与生长平衡机理图本文的研究揭示了长寿的林木通过演化出了一个补偿机制来维持生长与年龄之间的平衡。这种补偿机制包括了持续的形成层分裂、抗性相关基因的高表达以及预保护性次生代谢物的持续合成能力。
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