●关于核酸检测的思考●
新型冠状病毒（-nCoV）（以下简称新冠）引起新冠肺炎(COVID-19)流行，新冠病毒的核酸检测在疾病诊断和治疗评估中发挥了重要作用。目前已有多家厂家的核酸检测产品通过国家药监局审批，但多地出现新冠病毒核酸检测“假阴性”频出，这使核酸检测受到前所未有的关注。
这不禁让小编想到了同为病毒检测的HPV核酸检测。由于HPV核酸检测广泛应用于宫颈癌筛查中，其假阴性和假阳性的结果引起的潜在公共卫生损害风险较为显着。假阴性结果可能导致诊断和治疗不及时，假阳性结果可能导致不必要侵入性治疗。
由于新冠肺炎与宫颈癌病因皆为病毒，在此不妨粗略对比分析两种核酸检测试剂。
01
病原体与疾病
病原体与疾病
宫颈癌
持续性的高危型HPV感染是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因。全球范围的研究结果显示，在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在，HPV16/18型是最主要的致癌型别（导致70%以上的宫颈癌）。
在有性生活史的女性中生殖道HPV感染具有普遍性，据统计70%～80%的女性在其一生中会有至少一次的HPV感染，但大多数感染为自限性，超过90％的感染的女性会在6到24个月之间可以通过自身免疫系统清除HPV感染。
新型冠状病毒肺炎
新型冠状病毒是新冠肺炎的病原体，主要通过呼吸道飞沫和亲密接触传播，人群普遍易感,潜伏期1-14天,多为3-7天。
病毒感染机制与疾病致病机制更有待进一步研究。
02
注册审批要求
核酸检测试剂是按照三类医疗器械进行管理的，试剂需经过临床验证，方可提交审批。
HPV病毒核酸检测
对HPV临床试验要求包括两部分内容，第一部分为HPV核酸检测准确性验证，临床样本不少于500例；
第二部分为试剂盒针对具体预期用途的临床有效性验证。HPV病毒核酸检测在临床应用于：ASC-US人群的分流、宫颈癌联合筛查和宫颈癌初筛。
针对临床预期用途ASC-US分流，临床试验终点病理学检查结果≥CIN2的例数应不少于60例；
针对临床预期用途-联合筛查/HPV初筛，随访时间建议至少持续三年，临床试验终点病理学检查结果≥CIN2的例数应不少于60例;
新型冠状病毒核酸检测
大多数新型冠状病毒检测试剂都是靶向新型冠状病毒的特定区域，通过RT-PCR扩增病毒的ORF1ab基因和N基因等进行荧光定量检测。
由于特殊时期，大多数试剂开发设计只能根据有限的公开数据进行引物设计，缺乏了解大样本中的实际情况，更难进行大规模临床样本的临床验证。
03
检测阈值的设定
检测阈值
HPV病毒核酸检测
90％的HPV感染可通过自身免疫系统清除，故HPV检测并非单纯检测HPV病毒。
HPV检测用于宫颈癌筛查的目的，是为了找出当前或未来可能发展为癌或癌前病变的高风险人群；发现和预测高级别宫颈病变CIN2+的风险，因此HPV检测结果需与临床病变密切相关。
HPV检测应以CIN2+作为研究判定终点，检测CIN2+和CIN3+的灵敏度至少≥90%。
新型冠状病毒核酸检测
目前的新冠肺炎确诊标准之一:疑似患者, 如新冠病毒核酸检测为阳性即可确诊，这则要求检测试剂盒对病毒的灵敏度越高越好，能检测到的病毒拷贝数越小越好。
目前大多数冠状病毒核酸检测试剂盒都是针对一种样本类型的检测阈值, 而临床上多种标本类型，比如鼻咽拭子、痰液、血液、肺泡灌洗液，其他下呼吸道分泌物，粪便等。不同标本类型的检测阈值是否一致,目前缺乏验证, 这也是导致不同标本类型结果不一致的原因之一。
对核酸检测试剂来说，如何保证核酸检测试剂质量，规范核酸检测试剂的应用，是非常重要的问题。现阶段的新冠病毒核酸检测试剂均为应急性审批（注册证有效期为一年），最终还需要按照法规要求补充完成所有的临床验证才能延续注册，从而用于常规临床诊断。
*注：相关信息一览
参考文献：
新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）
《人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型、试剂技术审查指导原则》
本文经由罗氏医学部审核后发布。
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